PAX Blood microRNA Kit 核酸提取
PAX Blood miRNA Kit設(shè)計(jì)用于從儲(chǔ)存在保存試劑和PAXgene®中的血液樣品中分離總RNA>18個(gè)核苷酸（包括miRNA）;血液 RNA 管。該程序可wan全去除污染物和酶抑制劑，從而產(chǎn)生高質(zhì)量的 RNA。使用 PAX Blood miRNA 試劑盒純化的 RNA 可直接用于 RT-PCR 等應(yīng)用。PAX Blood microRNA Kit 核酸提取
PAX Blood miRNA Kit (For PAXgene Blood RNA Tube)
PAX Blood microRNA Kit 核酸提取
目錄號(hào)：91511
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
PAX Blood miRNA Kit設(shè)計(jì)用于從儲(chǔ)存在保存試劑和PAXgene®中的血液樣品中分離總RNA>18個(gè)核苷酸（包括miRNA）;血液 RNA 管。該程序可wan全去除污染物和酶抑制劑，從而產(chǎn)生高質(zhì)量的 RNA。使用 PAX Blood miRNA 試劑盒純化的 RNA 可直接用于 RT-PCR 等應(yīng)用。
從保存試劑中取出樣品。對(duì)于儲(chǔ)存在 PAXgene 中的血液樣本®血液 RNA 管，通過離心收集細(xì)胞。樣品在含有蛋白酶 K 的優(yōu)化緩沖液下洗滌和裂解。將樣品離心以去除細(xì)胞碎片和其他顆粒。用異丙醇調(diào)整結(jié)合條件后，將樣品上樣到 RNA 結(jié)合柱上。通過短暫的離心或真空步驟，樣品通過結(jié)合 RNA/miRNA 的柱基質(zhì)。經(jīng)過三個(gè)洗滌步驟后，用不含 RNase 的水洗脫純化的 RNA/miRNA。
產(chǎn)品特點(diǎn)
配套PAXgene采血/RNA保存管提取血液microRNA
Kit Contents and Storage
Kit Contents | Storage | 50 Preps (91511-50) |
Resuspension Buffer | RT | 20 ml |
Binding Buffer | RT | 50 ml |
WashSolution 1 | RT | 12 ml Add indicated ethanol before first use |
WashSolution 2/3 | RT | 10 ml Add indicated ethanol before first use |
RNase-free H2O | RT | 10 ml |
DNase Buffer | –20 °C | 1.25 ml x 2 |
RNase free DNase I | –20 °C | 250 μl |
Proteinase K (20mg / ml) | –20 °C | 20 mg x 1 tube |
RNA Binding Columns | RT | 50 |
注意：蛋白酶 K 是一種凍干物。離心幾秒鐘，然后用 1 ml 蒸餾水等分溶液復(fù)溶。在 –20 °C 下儲(chǔ)存。 避免反復(fù)凍融。所有試劑在指ding溫度下儲(chǔ)存時(shí)，可穩(wěn)定保存 9 個(gè)月。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)
描述
PAX Blood miRNA Kit設(shè)計(jì)用于從儲(chǔ)存在保存試劑和PAXgene® Blood RNA Tube中的血液樣本中分離總RNA>18個(gè)核苷酸（包括miRNA）。該程序可wan全去除污染物和酶抑制劑，從而產(chǎn)生高質(zhì)量的 RNA。使用 PAX Blood miRNA 試劑盒純化的 RNA 可直接用于 RT-PCR 等應(yīng)用。
從保存試劑中取出樣品。對(duì)于儲(chǔ)存在 PAXgene® Blood RNA Tubes 中的血液樣本，通過離心收集細(xì)胞。樣品在含有蛋白酶 K 的優(yōu)化緩沖液下洗滌和裂解。將樣品離心以去除細(xì)胞碎片和其他顆粒。用異丙醇調(diào)整結(jié)合條件后，將樣品上樣到 RNA 結(jié)合柱上。通過短暫的離心或真空步驟，樣品通過結(jié)合 RNA/miRNA 的柱基質(zhì)。經(jīng)過三個(gè)洗滌步驟后，用不含 RNase 的水洗脫純化的 RNA/miRNA。
用戶提供的材料和設(shè)備：
1. 微量離心機(jī)的離心能力為 13,000 x g
2. 100% 異丙醇
3. 不含 RNase 的過濾移液器吸頭
4. 不含 RNase 的水
5. 1.5 或 2.0 ml 微量離心管
6. 搖動(dòng)培養(yǎng)箱或加熱塊，溫度可達(dá) 55°C、65°C
7. 帶水平轉(zhuǎn)子的離心機(jī)，離心力可達(dá) 5,500 x g
注意：
shou次使用前，將規(guī)定量的乙醇加入洗滌液中
溶液 1 和洗滌溶液 2/3 瓶，充分混合，并用勾號(hào)標(biāo)記瓶子。
將培養(yǎng)箱或加熱塊加熱至 55°C。
1. 使用水平轉(zhuǎn)子以 3,000-5,000 x g 的離心力離心 PAXgene® Blood RNA 管 10 分鐘。
2. 吸出并丟棄上清液。
3. 加入 4 mL 不含 RNase 的水。渦旋以wan全重懸沉淀。
4. 使用水平轉(zhuǎn)子以 3,000-5,000 x g 的離心力離心 PAXgene® Blood RNA Tube 10 分鐘。
5. 吸出并丟棄上清液。
注意：不wan全去除上清液會(huì)降低裂解效率并稀釋裂解物，從而降低 RNA 產(chǎn)量。
6. 加入 350 μl 重懸緩沖液。渦旋以wan全重懸沉淀。
7. 將樣品轉(zhuǎn)移到新的 1.5 ml 微量離心管中。
8. 加入 300 μL 結(jié)合緩沖液和 20 μL 蛋白酶 K 溶液。渦旋 5 秒鐘以充分混合。
9. 使用振蕩培養(yǎng)箱在 55°C 下孵育 10 分鐘。
10. 可選：將裂解物通過安裝在注射器上的 20 號(hào)針頭（直徑 0.9 mm）至少 5 次，或使用電子組織勻漿器勻漿。此步驟剪切基因組 DNA，降低裂解物的粘度，并提高產(chǎn)量。
11. 將勻漿以 13,000 rpm 離心 3 min。將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中。
12. 加入等體積的 100% 異丙醇。渦旋充分混合。
13. 將最多 700 μl 混合物轉(zhuǎn)移至 2 ml 收集管（提供）中的 RNA 結(jié)合柱中。
14. 以最大速度離心 1 分鐘。
15. 吸出并丟棄濾液，重復(fù)使用收集管。
16.重復(fù)步驟 13-15，直到剩余樣品轉(zhuǎn)移到 RNA 結(jié)合柱中。
17. 加入 350 μl 洗滌液 1.
18. 以最大速度離心 1 分鐘。
19. 吸出并丟棄濾液，重復(fù)使用收集管。
20. 對(duì)于每個(gè) RNA 結(jié)合柱，準(zhǔn)備 DNase I 消化
反應(yīng)混合物如下：
Buffer | Volume per Prep | 10 Preps |
DNase I Buffer | 45 μl | 450 μl |
RNase-free DNase I | 5 μl | 50 μl |
Total volume | 50 μl | 500 μl |
重要說明：
• DNase I 非常敏感，容易發(fā)生物理變性。不要渦旋 DNase I 混合物。倒置試管輕輕混勻。
• 在 RNA 分離之前新鮮制備 DNase I 儲(chǔ)備液。
• 標(biāo)準(zhǔn) DNase 緩沖液與膜上 DNase I 消化不兼容。使用其他緩沖液可能會(huì)影響 RNA 與基質(zhì)的結(jié)合，并可能降低 RNA 產(chǎn)量和純度。
• 所有步驟必須在室溫下進(jìn)行?？焖俚⌒牡毓ぷ?。
21. 將 50 μl DNase I 消化反應(yīng)混合物直接移液到 RNA 結(jié)合柱的中心表面。
注意：確保將 DNase I 消化混合物直接移液到膜上。如果一些混合物保留在 RNA 結(jié)合柱的壁或 O 形圈上，則 DNase I 消化將不wan全
22. 在室溫下靜置 15 分鐘。
23. 加入 350 μl 洗滌液 1.以最大速度離心 1 分鐘。
24. 吸出并丟棄濾液，重復(fù)使用收集管。
25. 加入 500 μl 洗滌液 2/3。以最大速度離心 1 分鐘。
26. 吸出并丟棄濾液，重復(fù)使用收集管。
27. 重復(fù)步驟 25-26 進(jìn)行第二個(gè)洗滌液 2/3 洗滌步驟。
28. 以最大速度離心空的 RNA 結(jié)合柱 2 分鐘，以干燥柱基質(zhì)。
注意：洗脫前干燥柱膜很重要。
殘留的乙醇可能會(huì)干擾下游應(yīng)用。
29. 將 RNA 結(jié)合柱轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 微量離心管中。
30. 將 50-70 μl 不含 RNase 的水直接加入到膜中心（可選：將水預(yù)熱至 70–90°C 將增加 RNA 產(chǎn)量）。在室溫下靜置 1 分鐘。
31. 以最大速度離心 2 分鐘。
PAX Blood microRNA Kit 核酸提取
