RNAzol Plus Reagent （Trizol）核酸提取
與傳統(tǒng) Trizol 提取方法相比，RNAzol Plus 不需要使用氯仿進(jìn)行分層，操作更簡單，且全程可在常溫進(jìn)行。RNAzol Plus Reagent是Trizol的升級版——免氯仿，具有和Trizol類似的適用范圍，可以從動物組織、培養(yǎng)細(xì)胞、植物材料、真菌、細(xì)菌及各種微生物等樣品中提取總RNA。RNAzol Plus Reagent （Trizol）核酸提取
免氯仿總 RNA 提取試劑RNAzol Plus Reagent (NO Chloroform)
RNAzol Plus Reagent （Trizol）核酸提取
目錄號：91021
產(chǎn)品內(nèi)容
產(chǎn)品成份 | 91021-100 |
RNAzol Plus Reagent | 100 ml |
自備試劑
異丙醇、RNase-Free H2O、75%乙醇（使用 RNase-Free H2O 配制）
保存條件
在室溫下能穩(wěn)定保存12個(gè)月。盡管如此，為達(dá)到最佳效果，我們建議保存在2 ~ 8℃。
產(chǎn)品簡介
與傳統(tǒng) Trizol 提取方法相比，RNAzol Plus 不需要使用氯仿進(jìn)行分層，操作更簡單，且全程可在常溫進(jìn)行。
RNAzol Plus Reagent是Trizol的升級版——免氯仿，具有和Trizol類似的適用范圍，可以從動物組織、培養(yǎng)細(xì)胞、植物材料、真菌、細(xì)菌及各種微生物等樣品中提取總RNA。
本產(chǎn)品提取的RNA沒有DNA和蛋白的污染，可以直接用于cDNA克隆、RT-qPCR檢測、mRNA 純化、體外翻譯、Northern blotting雜交、高通量測序等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
RNAzol Plus 既可用于小量樣本（50-100mg 組織、5×106細(xì)胞）的總RNA提取，又可用于大量樣本（≥1g組織、≥107細(xì)胞）的總RNA提取。
注意事項(xiàng)
1) RNA在裂解液RNAzol Plus中時(shí)不會被RNase降解，但提取后繼續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含RNase的吸頭，建議直接購買GeneBetter商品化的RNase-Free的吸頭。研缽用水che底洗凈，在150℃烘干即可。
2) 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會影響RNA的提取得率和質(zhì)量。
3) 樣品加入裂解液RNAzol Plus勻漿后，樣品可在–80℃保存一個(gè)月以上。
4) 取RNA樣本時(shí)，把新鮮組織樣本浸入RNAsafe(RNA樣品保存液，91115-100)中，可在 37℃保存一天，在25℃保存一周，在4℃保存一個(gè)月，在-20℃或者–80℃長期保存。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)
操作步驟
提示：所有離心步驟均需要在室溫（15 ~37℃）下進(jìn)行，提取效果更佳！
1. 材料處理：
a．植物組織（植物、真菌）：取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或?qū)⒅参锝M織jian碎后在 RNAzol Plus 中研磨。每20-50mg組織加0.5ml裂解液RNAzol Plus，劇烈渦旋震蕩20 sec，混勻。
b．動物組織：取新鮮或-70℃凍存組織，每15-50mg 組織加 0.5ml裂解液 RNAzol Plus，用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理?；?qū)⒔M織在液氮中磨碎后加入RNAzol Plus，劇烈渦旋震蕩 20 sec，混勻。
c． 單層貼壁培養(yǎng)細(xì)胞：吸去培養(yǎng)液，加入適量裂解液RNAzol Plus，每10cm2加0.5ml 裂解液RNAzol Plus，（例如：3.5cm培養(yǎng)皿加0.5ml RNAzol Plus）, 用移液器反復(fù)吹打幾次，裂解細(xì)胞。
d．細(xì)胞懸液（動物細(xì)胞、植物、酵母、細(xì)菌）：離心收集細(xì)胞，棄上清，每5×106個(gè)細(xì)胞加0.5ml裂解液RNAzol Plus。加裂解液 RNAzol Plus 前不要洗滌細(xì)胞，以免降解 mRNA。
e．血液（血液、血漿、血清）：每 200 ul（低于 200 ul 時(shí)，可用 RNase-free H2O 補(bǔ)足）血液、血漿、血清等液體樣本，加入0.5ml RNAzol Plus后，劇烈渦旋震混勻 。
2. 加入200ul RNase-free H2O(RNAzol Plus 體積的0.4倍)，蓋好管蓋，劇烈振蕩混勻，室溫放置5min。
3. 室溫12,000rpm離心15min，樣品將分為二層，下層沉淀和上層水相，RNA主要在上層水相(約630 ul)中，轉(zhuǎn)移500 ul水相到一新的離心管中。
注意：提取微量樣本時(shí)，如果不出現(xiàn)分層，則轉(zhuǎn)移全部上清。
4. 在得到的水相溶液中加入等體積的異丙醇，顛倒混勻，室溫放置 10 min。
5. 室溫 12,000 rpm 離心 10 min，通常可以看到白色沉淀，棄上清。
（離心前 RNA 沉淀通常是看不見的，離心后在管側(cè)或管底成薄片狀沉淀。）
6. 加入1ml 75%乙醇洗滌沉淀，渦旋震蕩15sec,讓沉淀懸浮起來，并上下顛倒數(shù)次。
7. 室溫 12,000 rpm 離心3分鐘，倒出上清，注意不要倒出沉淀，剩余的少量液體短暫離心，然后用槍頭吸出，注意不要吸棄沉淀。
8. 可選步驟：重復(fù)步驟6和7一次，可增加純度。
9. 室溫放置約1分鐘，晾干。加入50~100 ul的RNase-Free ddH2O，吹打混勻，充分溶解RNA。
10. 得到的RNA，可立即用于下游實(shí)驗(yàn)，或于-70℃保存，防止降解。
相關(guān)產(chǎn)品：
71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）
71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）
71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)
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