細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒 NobleRyder P0914
北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒 NobleRyder P0914量大優(yōu)惠，咨詢 ：
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品包裝 | 產(chǎn)品價(jià)格 |
P0914 | 細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒 | 50次 | 420.00元 |
P0914 | 細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒 | 200次 | 980.00元 |
1、在研究細(xì)胞時(shí)經(jīng)常要研究細(xì)胞的不同組份，而研究得zui多的兩個(gè)細(xì)胞組份就是細(xì)胞核和細(xì)胞漿。分離細(xì)胞核蛋白和細(xì)胞漿蛋白，不僅可以用于研究蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位，而且很多時(shí)候分離出來(lái)的核蛋白可以用于轉(zhuǎn)錄調(diào)控方面的研究，例如EMSA（也稱(chēng)gelshift），footprinting等。
細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒（Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit）提供了一種比較簡(jiǎn)單、方便的從培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織中抽提細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白的方法。約90分鐘就可以完成培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白的分離。抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，報(bào)告基因檢測(cè)以及酶活力測(cè)定等后續(xù)操作。
本試劑盒是通過(guò)細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A和B，在低滲透壓條件下，使細(xì)胞充分膨脹，然后破壞細(xì)胞膜，釋放出細(xì)胞漿蛋白，然后通過(guò)離心得到細(xì)胞核沉淀。zui后通過(guò)高鹽的細(xì)胞核蛋白抽提試劑抽提得到細(xì)胞核蛋白。
本試劑盒可以抽提50個(gè)樣品，如果每個(gè)樣品的數(shù)量為約二百萬(wàn)細(xì)胞或約60毫克組織。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 包裝50T | 包裝200T |
P0914-1 | 細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A | 10ml | 40ml |
P0914-2 | 細(xì)胞漿蛋白抽提試劑B | 0.5ml | 2.0ml |
P0914-3 | 細(xì)胞核蛋白抽提試劑 | 2.5ml | 10ml |
| PMSF（100mM） | 1.5ml | 1.5ml |
| 說(shuō)明書(shū) | 1份 | 1份 |
2、
保存條件：
-20℃保存，一年有效。
注意事項(xiàng)：
PMSF一定要在抽提試劑加入到樣品中前2-3分鐘內(nèi)加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。
抽提蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
本試劑盒對(duì)于組織樣品，僅適合于新鮮組織，對(duì)凍存過(guò)的組織抽提效果很差?？梢猿樘岬慕M織樣品數(shù)通常不足100個(gè)。
使用本試劑盒抽提到的細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白均可直接用我們生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。但不適合用Bradford法測(cè)定蛋白濃度。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
3、 使用說(shuō)明：
1. 準(zhǔn)備溶液：溫融解試劑盒中的三種試劑，溶解后立即放置在冰上，混勻。取適當(dāng)量的細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A備用，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。取適當(dāng)量的細(xì)胞核蛋白抽提試劑備用，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。
2. 對(duì)于貼壁細(xì)胞：用PBS洗一遍，用細(xì)胞刮子刮下細(xì)胞，或用EDTA溶液處理細(xì)胞使細(xì)胞不再貼壁很緊，并用移液器吹打下細(xì)胞。離心收集細(xì)胞，盡zui大努力吸盡上清，留下細(xì)胞沉淀備用。盡量避免用胰酶消化細(xì)胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。
3. 對(duì)于懸浮細(xì)胞：用PBS洗一遍，離心收集細(xì)胞，盡zui大努力吸盡上清，留下細(xì)胞沉淀備用。
4. 每20微升細(xì)胞沉淀加入200微升添加了PMSF的細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A。（對(duì)于二百萬(wàn)Hela細(xì)胞，其細(xì)胞沉淀的體積大約為20微升或40毫克。）
5. zui高速劇烈Vortex 5秒，把細(xì)胞沉淀*懸浮并分散開(kāi)。（如果細(xì)胞沉淀沒(méi)有*懸浮并分散開(kāi)，可以適當(dāng)延長(zhǎng)vortex時(shí)間。）
6. 冰浴10-15分鐘。
7. 加入細(xì)胞漿蛋白抽提試劑B 10微升。zui高速劇烈Vortex 5秒，冰浴1分鐘。
8. zui高速劇烈Vortex 5秒，4℃ 12,000-16,000g離心5分鐘。
9. 立即吸取上清至一預(yù)冷的塑料管中，即為抽提得到的細(xì)胞漿蛋白。可以立即使用，也可以凍存。（千萬(wàn)不要觸及沉淀，可以在沉淀上方保留極小體積的上清，以免觸及沉淀。）
10. 對(duì)于沉淀，*吸盡殘余的上清，加入50微升添加了PMSF的細(xì)胞核蛋白抽提試劑。（不吸盡上清會(huì)帶來(lái)細(xì)胞漿蛋白的污染。）
11. zui高速劇烈Vortex 15-30秒，把細(xì)胞沉淀*懸浮并分散開(kāi)。然后放回冰浴中，每隔1-2分鐘再高速劇烈Vortex 15-30秒，共30分鐘。
12. 4℃ 12,000-16,000g離心10分鐘。
13. 立即吸取上清至一預(yù)冷的塑料管中，即為抽提得到的細(xì)胞核蛋白?？梢粤⒓词褂?，也可以-70℃凍存。
14. 對(duì)于新鮮組織：
A. 把組織盡可能切成非常細(xì)小的碎片。按照20:1的比例混合適當(dāng)量的細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A和B（例如200微升細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A中加入10微升抽提試劑B）。并加入PMSF至zui終濃度為1mM配制成組織勻漿液。按照每60mg組織加入200微升組織勻漿液的比例混合組織和組織勻漿液，并在玻璃勻漿器內(nèi)充分勻漿。勻漿需在冰浴或4℃進(jìn)行。
B. 勻漿后把勻漿液轉(zhuǎn)移到塑料離心管內(nèi)，冰浴放置15分鐘。
C. 4℃ 1,500g離心5分鐘。把上清轉(zhuǎn)移至一預(yù)冷的塑料管中，為抽提得到的部分細(xì)胞漿蛋白。（吸上清時(shí)千萬(wàn)不要觸及沉淀。）
D. 對(duì)于沉淀，到了這一步已經(jīng)充分勻漿，但很多細(xì)胞還沒(méi)有破碎。接下去按照使用說(shuō)明的步驟4開(kāi)始操作，即把沉淀當(dāng)做已經(jīng)離心收集好的細(xì)胞沉淀操作，按照步驟4至步驟13抽提得到細(xì)胞漿蛋白和細(xì)胞核蛋白。抽提得到的細(xì)胞漿蛋白可以和步驟14C中抽提得到的細(xì)胞漿蛋白合并。
北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū)，是一家專(zhuān)業(yè)從事生化試劑、分子生物學(xué)試劑、實(shí)驗(yàn)耗材及實(shí)驗(yàn)儀器研發(fā)、銷(xiāo)售、服務(wù)為一體的生物科技公司，公司主要經(jīng)營(yíng)的進(jìn)口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, Fermantas（MBI）, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等；產(chǎn)品涉及化工原料、生化試劑、分子克隆相關(guān)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)及檢測(cè)常用試劑、實(shí)驗(yàn)室常用耗材及儀器。
細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒 NobleRyder P0914
