羅氏蛋白酶K是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，用于生物樣品中蛋白質的一般降解。從林伯氏白色念球菌(tritirachium album limber)中純化得到。據資料顯示：該酶有兩個ca2+結合位點，它們離酶的活性中心有一定距離，與催化機理并無直接關系。然而，如果從該酶中除去ca2+，由于出現(xiàn)遠程的結構變化，催化活性將喪失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質。所以，蛋白酶k消化過程中通常加入edta(以抑制依賴于mg2+的核酸酶的作用)。但是，如果要消化對蛋白酶k具有較強耐性的蛋白，如角蛋白一類，則可能需要使用含有1mmol/l ca2+而不含edta的緩沖液。在消化完畢后、純化核酸前要加入EGTA(ph8.0)至終濃度為2mmol/l,以鰲合ca2+。

　　羅氏蛋白酶K，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于羅氏蛋白酶K在尿素和SDS中穩(wěn)定，還具有降解天然蛋白質的能力，因而它應用很廣泛，包括制備脈沖電泳的染色體DNA，蛋白質印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。羅氏蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml。在較廣的pH范圍內(pH 4-12.5)均有活性。