你知道該如何選擇判斷RIPA裂解液么?下面就讓我們一起來(lái)了解一下吧。
 

　　一、如何選擇合適的RIPA裂解液?
 

　　如果您只是要做普通的WB、IP或者co-IP，我們建議您使用免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液(20118)，該裂解液在裂解細(xì)胞或組織后一般不會(huì)形成粘滯的透明狀DNA團(tuán)塊，不必采用超聲處理就可進(jìn)行下一步操作。同時(shí)，該裂解液還適用于磷酸化蛋白的WB檢測(cè)。
 

　　如果使用免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液(20118)的效果不是很好，那您的蛋白可能比較特殊，我們建議您可以嘗試另外幾種裂解液。
 

　　如果您的蛋白是難溶性的蛋白，建議您可以嘗試使用裂解強(qiáng)度更高的裂解液，如RIPA裂解液(強(qiáng)/中);如果您在做IP實(shí)驗(yàn)的時(shí)候發(fā)現(xiàn)背景很高，即有很多非特異性蛋白被IP下來(lái)，這時(shí)候您需使用裂解強(qiáng)度較強(qiáng)的裂解液，比如RIPA裂解液(強(qiáng)/中)。
 

　　反之，如果您發(fā)現(xiàn)目的蛋白無(wú)法IP下來(lái)，則說(shuō)明您使用的裂解液強(qiáng)度過(guò)強(qiáng)，此時(shí)需使用裂解強(qiáng)度較弱的裂解液，比如RIPA裂解液(弱)。
 

　　二、如何判斷細(xì)胞的裂解程度?
 

　　細(xì)胞裂解：加入RIPA后，充分裂解的細(xì)胞，沒(méi)有細(xì)胞沉淀，很粘稠。如果像渾濁的水一樣粘性很小則可能是裂解液得量加太多導(dǎo)致的;相反，如果RIPA裂解液后出現(xiàn)膠狀物體，離心不能沉淀則可能是蛋白太多，RIPA裂解液加入的量太少導(dǎo)致的。
 

　　組織裂解：先將組織剪成細(xì)小的碎片，之后利用勻漿器或超聲破碎的方法，鏡檢顯示細(xì)胞破碎率大于90%，同時(shí)組織已經(jīng)*裂解，沒(méi)有明顯的小組織塊。之后按照細(xì)胞裂解的步驟進(jìn)行裂解，裂解程度的判斷標(biāo)準(zhǔn)與細(xì)胞裂解一致。
 

　　RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn);如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則需通過(guò)超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測(cè)一些常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄因子，如NF-κB、p53等時(shí)，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子。